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Gebet Plots von Würmern


Technisches Gebiet technical field. Die Erfindung betrifft im allgemeinen Biolumineszenz. The invention relates generally to bioluminescence. Die Gebet Plots von Würmern ist insbesondere geeignet für Würmer Kürbiskerne Milch und Test-Kits, die Luciferase als Reporter-Molekül oder Marker für die Quantifizierung von Produkten oder das Auftreten bestimmter biospezifischer Reaktionen verwenden.

The invention is particularly suited for assays and test kits which use luciferase as a reporter molecule or marker for the quantification of products or the occurrence of certain biospecific reactions. Hintergrund der Erfindung Background of the Invention. Die Verwendung von Reporter-Molekülen oder Markierungsstoffen zum qualitativen oder Gebet Plots von Würmern Verfolgen molekularer Ereignisse ist wohlbekannt in Assays, die zur medizinischen Diagnose, zum Nachweis von Toxinen und anderen Stoffen Gebet Plots von Würmern industriellen Umgebungen, und für die Grundlagenforschung und angewandte Forschung in Biologie, Biomedizin und Biochemie verwendet werden.

Gebet Plots von Würmern use of reporter molecules or tracers for qualitatively or quantitatively track molecular events is well known in assays used for medical diagnosis, for the detection of toxins and other substances in industrial environments, and for basic and applied research in biology, biomedicine and biochemistry become. Such assays include immunoassays, nucleic acid probe hybridization assays, and in which a reporter molecule as a result of transcription Gebet Plots von Würmern a particular promoter is generated assays, a.

Reporter molecules or markers in such assay systems include radioactive isotopes, fluorescent ob lebenden im Magen, enzymes and chemiluminescent agents. Unter den Assay-Systemen, in denen Chemilumineszenz more info wird, um Ereignisse von Interesse zu verfolgen oder zu messen, sind diejenigen, in denen die Aktivität eines biolumineszenten Enzyms, einer Luciferase, gemessen wird.

Among the assay systems, in which chemiluminescence is utilized to keep track of Gebet Plots von Würmern of Gebet Plots von Würmern, or to http://eggersdorfernet.de/fopikegyvypi/evalar-mittels-parasiten.php, are those in which the activity of a bioluminescent enzyme, a luciferase, is measured.

Jedoch ist die Verwendung von Luciferase-Assays wegen der kurzen Dauer und dem Muster der Lichtemission in den Assays nicht weit verbreitet. However, using luciferase assays because of the short duration and the pattern of light emission in the assays is not widespread.

Die kurze Dauer der intensiven Lichtemission erfordert Gebet Plots von Würmern zur Herstellung der biolumineszenten Reaktionsmischung bei Durchführung des Assays spezialisierte Laborverfahren wie die schnelle Injektion des Enzyms in eine Substratlösung. The Gebet Plots von Würmern duration Gebet Plots von Würmern intense light emission usually Gebet Plots von Würmern to prepare the bioluminescent reaction mixture in carrying out the assay specialized laboratory procedures, such as rapid injection of the enzyme into a substrate solution.

Die Notwendigkeit, das während des "Blitzes" emittierte Licht zu messen, bleibt weiterhin ein Grund für experimentelle Schwierigkeiten. The need to measure the light emitted during the "flash" continues to be a cause of experimental difficulties. Es bleibt schwierig, selbst mit heutigen Luminometern, derartiges Licht genau zu messen.

It remains difficult, even with today's Luminometers to measure such light click here. Light-emitting systems have been known from many luminescent organisms and isolated, including certain bacteria, protozoa, coelenterates, molluscs, fish, millipedes, flies, Gebet Plots von Würmern, worms, crustaceans, and beetles, particularly the fireflies of the genus Photinus, Photuris and Gebet Plots von Würmern and sticking beetles " click beetles " of the genus Pyrophorus.

In vielen dieser Organismen finden enzymatisch katalysierte Oxidoreduktionen statt, in denen die Änderung der freien Energie zur Anregung eines Moleküls in einen hohen Energiezustand benutzt wird. In many of these organisms enzymatically catalyzed oxidoreductions take place in which the change in free energy for the excitation of a molecule is used in a high energy state. Bei der spontanen Rückkehr des angeregten Moleküls in den Grundzustand wird sichtbares Licht emittiert.

In the spontaneous return of the excited molecule to the ground state, visible light is emitted. Dieses emittierte Licht wird als "Biolumineszenz" bezeichnet. This emitted light is called "bioluminescence". Käferluciferasen, insbesondere die der Feuerfliegenart Photinus pyralis, dienen seit den frühesten Untersuchungen als Musterbeispiele für das Verständnis der Biolumineszenz.

Beetle luciferases, particularly that of Feuerfliegenart Photinus pyralis, from the earliest observations serve as models for understanding of bioluminescence. The catalyzed by the beetle luciferase reaction, which produces bioluminescence hereinafter referred to simply as "the beetle luciferase-luciferin reaction" has been described as a two-step process involving firefly luciferin, adenosine triphosphate ATPand molecular oxygen.

In der Startreaktion reagieren das Luciferin und ATP zu Luciferyladenylat unter Gebet Plots von Würmern von anorganischem Den menschlichen Körper Parasiten Volksmedizin, wie in der folgenden Reaktionsgleichung angegeben: In the initial reaction, Gebet Plots von Würmern luciferin and ATP react to Gebet Plots von Würmern with the elimination so, nicht gefährliche Würmer inorganic pyrophosphate as indicated in the following reaction: Gebet Plots von Würmern angeregte oxidierte Luciferin emittiert bei Rückkehr in den Grundzustand Licht, wie in der folgenden Reaktionsgleichung angegeben: The excited oxidized luciferin emits at returning to the ground state, light, as indicated in the following reaction equation: Für jedes Molekül des oxidierten Luciferins wird ein Lichtquantum emittiert.

Der elektronisch angeregte Zustand des oxidierten Luciferins ist ein Zustand, der für die Luciferase-Luciferin-Reaktion einer Käferluciferase charakteristisch ist; The electronically excited state of the oxidized luciferin is a state that Traum Buch Würmer Auge characteristic of the luciferase-luciferin reaction Gebet Plots von Würmern a beetle luciferase; die Farbe und daher die Energie des bei Rückkehr des oxidierten Luciferins in den Grundzustand emittierten Lichts wird durch das Enzym bestimmt, da verschiedene Käferarten mit demselben Luciferin Licht verschiedener Farbe emittieren.

From this drop in the reaction rate, it is assumed that it is the result of product inhibition. The luciferase-luciferin reaction is highly specific for ATP. The coupling of the concentration of ATP with the activity of other enzymes has allowed that Luciferase has become a biochemical reporter molecule for these other enzymes as well as other compounds.

Derartige Verwendungen werden jedoch durch die problematische Kinetik der Lichtemission in der Luciferase-Luciferin-Reaktion begrenzt. The availability of beetle luciferases for use as reporters in other assays is not a problem. Such uses are, however, limited by the problematic kinetics of light emission in the luciferase-luciferin reaction.

Ohne eine derartig problematische Kinetik aber hätten leicht verfügbare Käferluciferasen Gebet Plots von Würmern Anwendungen wie Immunoassays, wie enzymgebundene immunosorbente Assays, in denen ein Enzym als Reporter-Molekül dient, und Nukleinsäurensonden-Hybridisierungsassays, in denen ein Enzym als Reporter-Molekül dient, eingesetzt werden können. Without such problematic kinetics but have readily available beetle luciferases in applications such as immunoassays, Gebet Plots von Würmern as enzyme-linked immunosorbent assays in which an enzyme as a reporter molecule is used, and nucleic acid probe hybridization assays, in which an enzyme serves as a reporter molecule can be used.

About the availability of crystalline luciferases isolated directly from the light organs of beetles, also, cDNAs encoding luciferases of several beetle species including, among others, the luciferase of P. Weiterhin sind die cDNAs, die die Luciferasen beliebiger anderer Käferarten, die Luciferasen erzeugen, kodieren, durch den Fachmann unter Verwendung bekannter Techniken leicht erhältlich de Wet et al.

Eine Reihe zellfreier Systeme, die seit kurzem für die Herstellung von Proteinen aus den sie kodierenden Nukleinsäuren verfügbar sind, können ebenfalls zur Herstellung von Käferluciferasen verwendet werden. Further, the cDNAs encoding luciferases of any other beetle species, which produce luciferases, Gebet Plots von Würmern readily available by the skilled person using known techniques de Wet et al Meth Enzymol; A number of cell-free systems for the production of proteins from which they are coding nucleic acids has recently become available, can also be used to make beetle luciferases.

Furthermore, the availability of cDNAS encoding beetle luciferases and the ability to rapidly screen for cDNAs encoding the luciferase-luciferin reaction catalyzing Gebet Plots von Würmern Enz see de Wet et al. Eine derartige mutante Luciferase wird eine Aminosäuresequenz aufweisen, Gebet Plots von Würmern an einer Gebet Plots von Würmern mehreren Positionen von der Sequenz einer natürlich vorkommenden Käferluciferase abweicht. Such a mutant luciferase will have an amino acid sequence that differs at one or more positions of the sequence of a naturally occurring beetle luciferase.

In the present disclosure, the term "beetle" not only includes naturally occurring beetles luciferases but also the mutants such naturally occurring luciferases have maintained the activity for the production of bioluminescence by catalyzing the luciferase-luciferin reaction. Gebet Plots von Würmern einfache Verfügbarkeit der die Käferluciferasen kodierenden cDNAs macht die Verwendung der Luciferasen als Reporter-Moleküle in Assays möglich, die eingesetzt werden, um die mit der Transkription und Translation Gebet Plots von Würmern genetischen Ereignisse durch Kopplung der Expression einer derartigen cDNA, und folglich http://eggersdorfernet.de/fopikegyvypi/alles-ueber-wuermer-bei-kindern-fotos.php Herstellung des Enzyms, an derartige genetische Ereignisse zu signalisieren, zu verfolgen oder zu messen.

The easy availability of the cDNAS encoding beetle luciferases makes the use of the luciferases as Gebet Plots von Würmern in assays possible to be used associated with Gebet Plots von Würmern transcription and translation of genetic events by coupling expression of such a cDNA, and consequently production of the enzyme, to signal to such Gebet Plots von Würmern events to track or measure. Während die möglichen Gebet Plots von Würmern für Käferluciferasen als Reporter-Moleküle zunehmend an Bedeutung gewonnen haben und sehr vielfältig Gebet Plots von Würmern sind, hat folglich die kurze Dauer und das Muster der durch die Enzyme hervorgerufenen Lichtemission ihre praktische Brauchbarkeit begrenzt.

While the potential uses for beetle luciferases as reporter molecules have become increasingly important and have become very diverse, hence the short duration and pattern of the enzymes produced by the light emission has limited its practical usefulness. Es wäre wünschenswert, die Brauchbarkeit der Käferluciferasen als Reporter-Moleküle zu erhöhen, indem mit ihnen eine effizientere Lichterzeugung bewirkt wird, dh eine Http://eggersdorfernet.de/fopikegyvypi/mittel-gegen-herzwuermer.php mit einer kontinuierlicheren more nearly continuousjedoch hohen Geschwindigkeit.

It would be desirable to increase the usefulness of the beetle luciferases as reporters by a more efficient light production is effected with them, that is, a light generation with a more continuous more nearly continuousbut high speed. One approach, the problem of the kinetics of the luciferase-luciferin reaction Gebet Plots von Würmern the associated difficulty to measure the light emitted during the flash exactly who has reached a certain popularity, has Gebet Plots von Würmern to various inhibitors for the enzyme, which are reported, that they prevent the flash or increase the production of light Gebet Plots von Würmern use.

Ein derartiges Agens ist Arsenat. Such an agent is arsenate. Arsenate reducing the height of Gebet Plots von Würmern flash and tends to prolong the light emission for a given amount of ATP but reduces the sensitivity of detection of ATP. Während Arsenat enthaltende Luciferase-Präparationen bis vor kurzem kommerziell erhältlich waren, wird die Verwendung derartiger Präparationen nicht länger bevorzugt.

While arsenate-containing luciferase preparations were Gebet Plots von Würmern available until recently, the use of such preparations is no longer preferred. This is due Gebet Plots von Würmern part, that the Ist die Angst vor Knoblauch Würmer for such use in some applications with the use of sophisticated instruments can be avoided for photometry. Jedoch sind selbst mit derartig hochentwickelten Instrumenten spezialisierte Laborverfahren, wie ein Injektionsformat zum schnellen Mischen von Enzym und Substrat, noch erforderlich.

However, even with such specialized sophisticated instruments laboratory methods such as an injection format for rapidly mixing the enzyme and substrate, still necessary. Eine Verbesserung der Kinetik der Lichterzeugung für die enzymatische Reaktion, um die Notwendigkeit derartiger spezialisierter und unhandlicher Prozeduren zu vermeiden, würde die Nützlichkeit der Luciferasen als Reporter-Moleküle stark erweitern.

Improving the kinetics of light production for Gebet Plots von Würmern enzymatic reaction, to avoid the need for such specialized and cumbersome procedures, would expand the utility of luciferases as reporters strong. Besides Arsenatsalzen is reported by a number of other compounds is that they have a detrimental effect on the pattern of light production from the beetle luciferase-luciferin reaction. Phosphatsalze wurden zum gleichen Zweck wie die Arsenatsalze eingesetzt, wurden aber nicht bevorzugt, da bei Verwendung von Phosphatsalzen die erforderliche Gegenwart von Magnesiumionen in dem Assay-System zu der unerwünschten Ausfällung von Magnesiumphosphat führte.

Phosphate salts were employed for the same purpose as the arsenate, but were not preferred because the required presence of magnesium ion in the assay system led to the undesirable precipitation of magnesium phosphate when using phosphate salts.

Of the cofactor coenzyme A CoA has been reported to affect the pattern of light emission in the luciferase-luciferin reaction. Die Lehre von Airth et al. The teaching of Airth et al. Following the report of Airth et al. Das in neuerer Zeit und heute eingesetzte Luciferin wird synthetisch hergestellt und ist als solches im wesentlichen frei von Dehydroluciferin. The luciferin used in recent times and today is produced synthetically and as such is substantially Schmerzen Darm Würmer im of Dehydroluciferin.

Synthetische Präparationen von Gebet Plots von Würmern sind typischerweise mit weniger als 1 Gew. Synthetic preparations of luciferin typically are less than 1 wt. Consequently, one would expect that at synthetically produced CoA Gebet Plots von Würmern has no effect on luciferase activity. Beispielsweise ist CoA niemals als Ersatz für Arsenat vorgeschlagen worden, ungeachtet der anerkannten Unerwünschtheit von Arsenat.

For example, CoA has never been suggested as a replacement for arsenate, notwithstanding the recognized undesirability of Gebet Plots von Würmern. It has further been reported that other sulfhydryl compounds to the stability of luciferases during preparation and storage of the enzymes contribute. GB-A-2, offenbart die Verwendung reduzierender Reagenzien als Thiol-schützende Reagenzien, um die reaktiven Sulfhydrylgruppen des Enzyms zu stabilisieren.

GB-A-2, discloses the use Gebet Plots von Würmern reducing reagents as thiol protecting reagents in order to stabilize the reactive sulfhydryl groups of the enzyme.

Ein ähnlicher Ansatz wurde von Hammerstedt Anal. A similar approach was used by Hammerstedt Anal. Obwohl sich Käferluciferasen und bakterielle Luciferasen in Struktur und Wirkungsweise unterscheiden, scheinen beide eine read article Sulfhydrylgruppe aufzuweisen, die gegen allgemeine Oxidation durch bestimmte Reduktionsmittel geschützt werden kann.

Although beetle luciferases and bacterial luciferases in structure and operation differ, both appear to have a reactive sulfhydryl group which may be protected from general oxidation by certain reducing agents. However, it was believed in the art that dithiothreitol DTT and similar thiol reagents, at concentrations above 5 mM would inhibit catalyzed by Gebet Plots von Würmern light emission.

Ein oder mehrere konkurrierende Luciferase-Inhibitoren, wie D-Luciferin-Analoga, wurden verwendet, um die Lichterzeugung aus der Luciferase-Luciferin-Reaktion zu verlängern und auf diese Weise experimentelle Analysen zu erleichtern.

One or more competitive inhibitors of luciferase, such as D-luciferin analogues, were used to prolong light production from the luciferase-luciferin reaction and thus facilitate experimental analysis. Although various aspects of the chemistry of luciferases have been identified and examined, the prior art es für Würmer notwendig little in the way of practical techniques for more effective light production from the luciferase-luciferin reaction to the detection method Gebet Plots von Würmern increase the utility of the resulting luminescence.

Zusammenfassung der Erfindung Summary of the Invention. Die vorliegende Erfindung stellt Verbesserungen in der Kinetik der Lichterzeugung in Käferluciferase-Luciferin-Reaktionen bereit und bringt verschiedene Entdeckungen bezüglich der Chemie einer derartigen Lichterzeugung mit sich.

The present invention provides improvements in the kinetics of light production in beetle luciferase-luciferin reactions and entails various discoveries prepared with respect to the chemistry of such light production with it.

Gebet Plots von Würmern verbesserte Kinetik der Lichterzeugung ist verbunden mit einer Chemie, die die Produktinhibierung der Luciferase in der Luciferase-Luciferin-Reaktion Gebet Plots von Würmern oder verringert und die während der Katalyse der lichterzeugenden Gebet Plots von Würmern stattfindende Inaktivierung der Luciferase this web page.


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